Jingan DNA Polymerase簡稱Jingan酶,是一種兼顧了高保真性和高擴增效率的DNA聚合酶,是碧云天優先推薦的基因PCR克隆用酶。
Jingan酶可以催化5'至3'方向的依賴于DNA模板的脫氧核苷酸的聚合。同時Jingan酶有3'至5'的外切酶活性(proofreading activity)。另外,Jingan酶有5'至3'外切酶活性,但Jingan酶沒有反轉錄酶活性。
由于Jingan酶有3'至5'的外切酶活性,因此在PCR擴增過程中出錯的幾率大大降低,出錯率為1.6×10-6 per nt per cycle,略低于Pfu酶的2.6×10-6 per nt per cycle。
Jingan酶的DNA擴增效率大大高于Pfu酶,和Taq酶的擴增效率比較接近。因此Jingan酶很好地兼顧了擴增效率和擴增的準確性。 用途:高保真PCR(high fidelity PCR)、點突變、T載體克隆等各種常規PCR反應。
用Jingan酶擴增產生的PCR產物帶有3'-dA overhangs,可以用于基于T載體的PCR片斷克隆。
Jingan酶可以擴增長度達10kb的DNA片斷,最長可以擴增長達30kb的DNA片斷。通常適合擴增10kb以下的DNA片斷。 活性定義:One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 2mM MgSO4, 10mM (NH4)2SO4, 10mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP. 純度:不含DNA內切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,滿足常規PCR反應要求。 酶儲存溶液:20 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。 10×Jingan Buffer(with Mg2+):200 mM Tris-HCl(pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 100 mM KCl,20 mM MgSO4, 1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。 失活或抑制:酚氯仿抽提可以使Jingan酶失活。 包裝清單: